استفاده از ژن 16S rRNA در شناسایی گونه سوسک پوست‌خوار کاج از ایران
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
سوسک های پوست خوار در زیر خانواده Scolytinaeازبالا خانواده Curculionoideaقرار دارند و تاکنون بیش از 6000 گونه آن در سراسر جهان شناسایی و نام گذاری شده است. تعداد زیاد گونه در راسته سخت بالپوشان چالشی برای طبقه بندی محسوب می شود و به همین دلیل شناسایی مورفولوژیکی گونه های سوسک های پوست خوار امری دشوار است. لذا به منظور بررسی فون گونه های سوسک های پوست خوار کاج، شناسایی مولکولی با استفاده از توالی یابی DNA انجام شد. اهمیت بالای بارکد DNA در حشره شناسی به‌علت تنوع شدید حشرات و زیان اقتصادی و اهمیت اپیدمیولوژیک و زیستی لارو آن ها می باشد. ژن های rRNA برای زنده ماندن همه موجودات ضروری می باشند و هم چنین ردیف بازهای آلی در این ژن ها به شدت محافظت می شود و نرخ تکامل آهسته تری نسبت به سایر ژن ها دارند، به همین دلیل تعیین ردیف بازهای آلی ژن 16S rRNA به عنوان یک روش استاندارد برای شناسایی و تاکسونومی مرز بین گونه ها بکار می رود. نمونه برداری در سال 1394 از درختان کاج آلوده به سوسک پوست خوار عمدتا از اصفهان و هم‌چنین دیگر شهرها از قبیل تهران، شیراز، یزد، کرمان و خراسان جنوبی انجام و برای استخراج DNA نمونه ها از روشCTAB استفاده شد. به منظور شناسایی دقیق جنس و گونه سوسک های جمع آوری شده، از روش تکثیر و توالی یابی ناحیه 383 جفت باز ژن 16S rRNA استفاده شد. پس از توالی یابی قطعه ژنی و مقایسه آن با توالی های موجود در بانک ژن، گونه های سوسک پوست خوار (Wollaston, 1857) erosus Orthotomicus شناسایی شدند که با نتایج کلیدهای شناسایی و ویژگی های مورفولوژیکی سر، پیش گرده و بالپوش ها نیز همخوانی داشت. نتایج بلاست داده ها در پایگاه داده ژنومی از نمونه های جمع آوری شده در تمام مناطق شباهت 98 درصد با گونه O. erosus از یونان را نشان داد. هم چنین نتایج درخت فیلوژنی با استفاده از نرم افزار MEGA 6 به روش اتصال همسایه و مدل ماتریسی Kimura 2 parameter)) با روش Bootstrap برای 1000 تکرار بر روی شاخه ها نیز نشان داد که نمونه های جمع آوری شده به گونه O. erosus با شماره بارکد AF397502.1 تعلق دارند.
کلیدواژه ها