همراهی قارچ Didymella microchlamydospora با مرگ سرشاخه درختان زیتون از ایران
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
زیتون با نام علمی Olea europaea از تیره زیتون‌سانان، گیاهی درختی و همیشه سبز است. قدمت کشت زیتون در ایران به 4300 سال پیش برمی‌گردد. این درخت بیشتر به عنوان گیاه روغنی در مازندران و گیلان و یا به عنوان گیاه زینتی در شهرهای مختلف ایران کاشته می‌شود. در این مطالعه در طول سال‌های 1393 و 1394، طی بازدیدهای به عمل آمده از مناطق مختلف استان خوزستان، علائم زوال شدید در درختان زیتون هم‌چون زردی، پژمردگی، ریزش برگ، سرخشکیدگی، شانکر، تغییر رنگ بافت چوب در مقطع عرضی و هم-چنین ورقه ورقه شدن پوست شاخه‌ها و تنه مشاهده گردید. به منظور شناسایی بیمارگرهای همراه این علائم، شاخه‌های آلوده از شهرستان اهواز جمع‌آوری و به آزمایشگاه منتقل شدند. جهت جداسازی بیمارگرهای احتمالی، قطعات چوب به اندازه 0.5- 1 سانتی‌متر از حاشیه بین بافت آلوده و سالم تهیه و بعد از ضدعفونی سطحی با استفاده از هیپوکلریت سدیم 2% به مدت 2 دقیقه و 3 بار شستشو با آب مقطر سترون و پس از خشک شدن بوسیله کاغذ صافی سترون روی محیط غذایی سیب‌زمینی- دکستروز آگار (PDA) کشت شدند. سپس ظروف کشت به اتاقک کشت با دمای 28 درجه سانتی‌گراد منتقل و در شرایط تاریکی مطلق به مدت 5 روز نگهداری شدند. پس از آن قارچ‌های حاصله به روش تک اسپور خالص‌سازی گردیدند. سپس آن نمونه‌های خالص‌سازی شده به مدت 5 روز در شرایط فوق نگهداری شدند. جهت شناسائی مولکولی جدایه‌های به دست آمده، قطعه‌های 5 میلی‌متری از حاشیه پرگنه‌های قارچ در محیط PDAجدا و در محیط کشت مایع سیب‌زمینی- دکستروز (PDB) مایه زنی گردید. هفت روز پس از نگهداری در دمای 28 درجه سانتی‌گراد، تاریکی مطلق و همراه با تکان دادن، توده‌ی میسیلیومی رشد یافته، صاف گردید. پس از آن DNA از میسیلیوم‌های خشک- انجمادی و پودر شده استخراج شد. واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز با جفت آغازگرهای ITS1 و NL4 جهت تکثیر نواحی ITS ، D1 و D2 انجام شد. قطعات تکثیری خالص‌سازی و سپس توالی‌یابی گردیدند. توالی‌ها ویراستاری، مونتاژ و در بانک ژن ذخیره شدند (KX139018 وKX139027 ). جستجوی بلاست نشان داد که توالی مربوط به جدایه‌های مورد مطالعه با استرین‌های مرجع گونه D. microchlamidospora از جمله استرینD. Microchlamidospora CBS 105.95 (NR-135969) تشابه 99 درصدی دارد. آنالیز فیلوژنتیکی جدایه‌های حاصله در این مطالعه با توالی‌های مربوط به استرین‌های تیپ با استفاده از الگوریتم درست-نمائی بیشینه، تعلق آن‌ها را به این گونه تایید کرد. بر اساس اطلاعات موجود، این اولین گزارش از وقوع D. microchlamidospora روی زیتون در ایران و هم‌چنین دنیا می‌باشد.
کلیدواژه ها