جداسازی و شناسایی باکتری‌های اندوفیت بازدارنده رشد از درختان گردو در استان کرمانشاه
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
درخت گردو (Juglans sp.) از لحاظ اکولوژیکی، دارویی، ارزش غذایی و اقتصادی در ایران و جهان اهمیت بسیار بالایی دارد. گردوی ایرانی با نام علمی Juglans regia L. شناخته می‌شود. در سال 1394 ضمن بازدید از باغات گردو در مناطق مختلف استان کرمانشاه از ریشه، ساقه و برگ درختان سالم نمونه برداری صورت گرفت و نمونه ها به آزمایشگاه بیماری شناسی گیاهی منتقل شدند. بافت‌های گیاهی پس از ضد عفونی سطحی در 3-2 میلی لیتر آب مقطر سترون به قطعات کوچک خرد شدند. از سوسپانسیون حاصله بر روی محیط کشت King B agar کشت و به مدت 15 روز در دمای 28- 26 درجه سانتی‌گراد نگهداری گردید. کلنی های رشد یافته سپس جدا سازی و خالص سازی شدند و براساس آزمون‌های استاندارد باکتری شناسی مورد شناسایی قرار گرفت. با استفاده از روش PCR و آغازگرهای اختصاصی ژن 16S rDNA سه قطعه DNA به اندازه تقریبی هر کدام 1500 جفت باز آلی از سه کلنی مختلف تکثیر و تعیین توالی گردید. توالی‌های نوکلئوتیدی بدست آمده در صورت لزوم تصحیح و با استفاده از برنامه Blast n با سایر سویه های استاندارد موجود در NCBI مقایسه شد. جدایه RR4 دارای واکنش مثبت در آزمون‌های کاتالاز، گرم و تولید لیپاز و دارای واکنش منفی در آزمون‌های اکسیداز، فلورسنت و تولید پروتئاز بود. بر اساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه مورد مطالعه دارای 99% شباهت با Streptomyces pratensis بود. این جدایه توانایی ایجاد هاله بازدارنده و تولید آنتی بیوتیک بر روی محیط کشت حاوی کلنی باکتری همستیز Pseudomonas syringae را دارد. این جدایه همچنین توانایی تولید 3 میکروگرم بر میلی‌لیتر اکسین و 3/15 میکروگرم بر میلی‌لیتر جیبرلین را دارد. جدایه دوم با کد NR2دارای واکنش مثبت در آزمون‌های اکسیداز، کاتالاز و گرم و دارای واکنش منفی در آزمون‌های فلورسنت، تولید پروتئاز و تولید لیپاز بود. بر اساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه مورد مطالعه دارای 99% شباهت با Roseomonas rosea بود. این جدایه توانایی ایجاد هاله بازدارنده و تولید آنتی بیوتیک بر روی محیط کشت حاوی کلنی باکتری همستیز Pseudomonas syringae را دارد. این جدایه همچنین توانایی تولید ، 1/15 میکروگرم بر میلی‌لیتر جیبرلین را دارد. جدایه سوم با کد KS4 دارای واکنش مثبت در آزمون‌های کاتالاز و تولید پروتئاز و دارای واکنش منفی در آزمون‌های اکسیداز، فلورسنت، گرم و تولید لیپاز بود. بر اساس توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه مورد مطالعه دارای 99% شباهت با Arthrobacter oryzae بود. این جدایه توانایی ایجاد هاله بازدارنده و تولید آنتی بیوتیک بر روی محیط کشت حاوی کلنی باکتری همستیز Pseudomonas syringae را دارد. این جدایه همچنین توانایی تولید 5/2 میکروگرم بر میلی‌لیتر اکسین را دارد.
کلیدواژه ها